紫外分光光度計通過物質在光的照射激發下，產生了對光的吸收效應，物質對光的吸收具有選擇性的。各種不同的物質都具有各自的吸收光譜，因此當某單色光通過溶劑時，其能量就會被吸收而減弱，光能量減弱的程度與物質的濃度有一定的比例關系。用于定量時，在吸收波長處測量一定濃度樣品溶液的吸光度，并與一定濃度的對照溶液的吸光度進行比較或采用吸收系數法算出樣品溶液的濃度。
紫外分光光度計使用經驗：
1)若大幅度改變測試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正“0”和“100%”然后再測量。
2)指針式儀器在未接通電源時，電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況，需進行機械調零。
3)比色皿使用完畢后，請立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。
4)操作人員不應輕易動燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。
5)放大器靈敏度換擋后，必須重新調零。
6)比色杯的配套性問題。比色杯必須配套使用，否則將使測試結果失去意義。在進行每次測試前均應進行比較。
紫外分光光度計應用：用作物質鑒定、純度檢查，有機分子結構的研究。在定量方面，可測定結構比較復雜的化合物和混合物中各組分的含量，也可以測定物質的離解常數，絡合物的穩定常數物質分了量鑒別和微量滴定中指示終點以及在高效液相色譜中作檢測器等。
